Existe una necesidad crítica de un método de inactivación que inactive completamente los patógenos en el momento de la recolección de la muestra, manteniendo al mismo tiempo la calidad de ácido nucleico requerida para las pruebas de PCR de diagnóstico. Este método de inactivación es necesario para aliviar las preocupaciones sobre el potencial de transmisión, minimizar las complicaciones y el costo del envío, y permitir la realización de pruebas en laboratorios de menor contención, mejorando así el diagnóstico de enfermedades a través de un mejor tiempo de respuesta.
Este estudio evaluó un panel de 10 virus sustitutos que representan enfermedades animales altamente patógenas. Estos resultados mostraron que un medio de transporte molecular (PSMTM) comercial de PrimeStore® inactivó completamente todos los virus probados en un >99,99%, según lo determinado por ensayos de infectividad y paso en serie. Sin embargo, la detección de ácido nucleico viral mediante qRT-PCR fue comparable en condiciones de PSMTM y controladas. Estos resultados fueron consistentes cuando los virus se evaluaron en presencia de material biológico como sueros e hisopos cloacales para imitar las condiciones de diagnóstico de las muestras de virus aviares y no aviares, respectivamente. Los resultados de este estudio pueden ser utilizados por los laboratorios de pruebas diagnósticas para agentes altamente patógenos que afectan a poblaciones animales y humanas. Estos resultados se pueden utilizar para revisar las directrices para las pruebas diagnósticas de determinados agentes y el envío de sustancias infecciosas.
Introducción
Se están llevando a cabo esfuerzos de prevención para proteger a los animales en los Estados Unidos de enfermedades altamente contagiosas causadas por el virus de la peste porcina clásica (PPC), el virus de la peste porcina africana (PPA), el virus de la fiebre aftosa (FMDV), el virus de la encefalitis equina oriental (EEEV), el virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) y el virus de la influenza aviar A altamente patógena (IAAP), entre otros (1–3). Cuando no se dispone de una vacuna o un tratamiento aprobados, la despoblación se convierte en el curso de acción obligatorio para las explotaciones afectadas (4). Esta cuestión subraya la importancia crítica de los esfuerzos de prevención, ya que la despoblación perturba el suministro de alimentos y tiene importantes implicaciones financieras para los productores y los consumidores (1). Por ejemplo, entre 2018 y 2019 se notificó en China el mayor brote de PPA hasta la fecha, lo que supuso unas pérdidas financieras totales estimadas en más de 111.200 millones de dólares (5). El brote actual de gripe aviar altamente patógena, identificado por primera vez en los Estados Unidos en 2022, ha provocado pérdidas económicas actuales en los EE. UU. estimadas en un rango de USD 2.500 a 3 mil millones de dólares (6). Además, algunos de estos virus, como el FMDV, EEEV, NDV y la IAAP, son zoonóticos, lo que los convierte en una preocupación para la salud pública (7-10). Los esfuerzos de prevención incluyen pruebas de vigilancia activa (11).
Las pruebas de vigilancia activa requieren el envío de muestras sospechosas de enfermedades altamente contagiosas a las instalaciones de alta contención BSL3+ para realizar pruebas de confirmación por PCR a fin de cumplir con los requisitos de agentes seleccionados (12, 13). El envío de sustancias potencialmente infecciosas es costoso y urgente, y requiere contenedores de transporte especializados y una cadena de frío para evitar el deterioro de las muestras para las pruebas de PCR (14). Se necesita urgentemente un método de inactivación que proteja el contenido de ácidos nucleicos esencial para las pruebas de PCR, al tiempo que elimina la amenaza de transmisión y minimiza el requisito de temperatura, para minimizar los costos de envío y reducir la restricción de las pruebas de confirmación a instalaciones de menor nivel de bioseguridad (BSL2). La implementación de un método de inactivación aliviará la presión que la alta demanda de pruebas de PCR está ejerciendo sobre las limitadas instalaciones BSL3 en los Estados Unidos, disminuyendo así el tiempo de respuesta de las pruebas y mejorando las dificultades prácticas. Esto incluye mejorar las complicaciones de compartir reactivos entre laboratorios internacionales (15). El envío accidental de ántrax vivo a laboratorios dentro de los Estados Unidos debido a una inactivación incompleta resalta la importancia de un método de inactivación que proporcione un amortiguador de seguridad para su uso con patógenos de altas consecuencias (16).
Los tubos de medios de transporte molecular (PSMTM) de PrimeStore® contienen reactivos patentados que inactivan tanto los virus como las bacterias al alterar las membranas lipídicas e inhibir la maquinaria de replicación al tiempo que estabilizan los ácidos nucleicos (PrimeStore, Longhorn Vaccines and Diagnostics) (17, 18). Como se indica en la ficha de datos de seguridad disponible públicamente, este reactivo contiene una mezcla de tiocianato de guanidina, etanol y n-lauroilsarcosina (19). Anteriormente se ha demostrado que los reactivos a base de tiocianato de guanidina inactivan eficazmente el poliovirus y el virus de la fiebre aftosa, aunque la comparación de los resultados debe interpretarse con precaución, ya que la formulación exacta de la PSMTM es patentada (20, 21). Estudios previos han demostrado que el etanol y la n-lauroilsarcosina inactivan varios virus con envoltura y algunos sin envoltura al interactuar con lípidos y desnaturalizar proteínas (22).®
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